注意:因業務調整,暫不接受個人委托測試望見諒。
品系名稱:Tg(mpl:eGFP)smu4
英文名稱:Tg(mpl:eGFP)smu4
疾病名稱:NA
相關基因:i
背景品系:AB
遺傳類型:染色體顯性遺傳
繁殖方式:側交
繁殖代數:第5代
研究用途:用于血小板生成,血小板相關疾病病理機制的研究以及藥物評估篩選。
飼養環境:斑馬魚養殖系統,28.5℃
培育單位:南方醫科大學
保種單位:華南理工大學醫學院
資源鑒定:已通過實驗動物模型鑒定與評價工作委員會鑒定
鑒定日期:2020-05-02 00:00:00
1. Tg(mpl:eGFP)smu4轉基因系斑馬魚的表達譜
mpl-GFP陽性(mpl:eGFP +)細胞(血小板及血小板前體細胞)在波長488的激發光照射下發出綠色熒光,可以在熒光顯微鏡下直接觀察與計數。
mpl:eGFP+ 細胞與mpl的WISH(原位雜交染色)染色結果類似,約40hpf時從主動脈-性腺-中腎(AGM)和CHT區出現,隨后在CHT和循環中迅速增加,從2dpf出現在血液循環中,從8dpf開始逐漸減少,最后在11dpf左右時熒光消失。(如圖2所示)。
2. Tg(mpl:eGFP)smu4轉基因系斑馬魚的組織特異性
免疫組化抗體染色實驗顯示,mpl:eGFP表達既不與髓樣細胞(Lcp1+)重疊也不與紅細胞(Hbae1+)重疊,但與少量gata1+紅系前體細胞(gata1:DsRed+)重疊(圖3), 說明mpl:eGFP陽性細胞特異性標記gata1細胞衍生的血小板,不標記髓系細胞和紅系細胞。
3. Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚限定為血小板細胞的表型
比較mpl:eGFP和cd41:eGFP細胞群,mpl:eGFP陽性細胞群中的血小板標記基因cd42a,kif1b,lrrc32和nfe表達量更高,說明mpl:eGFP比cd41:eGFP更特異地標記了血小板(圖4 A)。mpl:eGFP 主要(約90%)標記細胞質稀少且細胞核濃縮的血小板細胞和血小板前體細胞,而cd41:eGFP細胞卻含有一小部分(30%)與HSPC對應的較大細胞(圖4 B-D)。
4. mpl:eGFP陽性細胞為有功能的血小板細胞
Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚的血管損傷后,循環中的mpl:eGFP+細胞可以到達傷口并發生凝結堵塞傷口(如圖5所示)。
5. mpl:eGFP陽性細胞受血小板生成信號通路調控
在Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚中過表達tpo的mRNA,血液中CHT造血區的mpl:eGFP+陽性細胞的表達會顯著增加。在Tg(mpl:eGFP)smu4斑馬魚中導入注射用的重組人IL-11,mpl:eGFP+細胞的表達也顯著增加(如圖6所示)。
Tg(mpl:eGFP)smu4是特異性標記血小板的轉基因系斑馬魚,特異性將血小板細胞標記為明亮的綠色熒光細胞,而幾乎不標記造血干祖細胞和其他造血譜系的細胞。(如圖1所示)
斑馬魚是雜食性動物,成年魚每天投喂2到3次,喂食量以5分鐘左右吃完為佳。本實驗室常用魚食有鹽水蝦和固體顆粒魚食。
暫無介紹
mpl啟動子驅動GFP綠色熒光蛋白,本轉基因系中的mpl啟動子為mpl基因(ID:ENSDARG00000039222)轉錄本上游的4651bp區域。
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