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B6-Prkag1tm1小鼠,動物試驗

原創發布者：北檢院發布時間：2023-03-01 點擊數：

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基本信息

品系名稱：B6-Prkag1^tm1小鼠

英文名稱：B6-Prkag1^tm1 mouse

疾病名稱：代謝類疾病

相關基因：PRKAG1

背景品系：C57BL/6J

遺傳類型：基因敲除

繁殖方式：HOM X HOM

繁殖代數：NA

研究用途：用于脂類合成、代謝等及信號轉導方面的研究。

飼養環境：屏障或隔離環境

培育單位：北京華阜康生物科技股份有限公司、中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

保種單位：中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

資源鑒定：否

鑒定日期：暫無介紹

特征描述

基因概述：

該基因編碼的蛋白是AMP激活蛋白激酶(AMPK)的調節亞基)。 AMPK是由α催化亞基、非催化β和γ亞基組成的異三聚體。 AMPK是一種重要的能量傳感酶，監測細胞能量狀態。在細胞代謝應激反應中，AMPK被激活，從而磷酸化和失活乙酰輔酶A羧化酶(ACC)和β-羥基β-甲基戊二酰CoA還原酶(HMGCR)，這是參與調節脂肪酸和膽固醇新生物合成的關鍵酶。該亞基是AMPK的γ調控亞基之一。另外，還觀察到編碼不同異構體的剪接轉錄體變體【1】。

蛋白功能：

AMP激活蛋白激酶(AMPK)的AMP/ATP結合亞基，一種能量傳感器蛋白激酶，在調節細胞能量代謝中起著關鍵作用。為了響應細胞內ATP水平的降低，AMPK激活了產生能量的途徑，并抑制了消耗能量的過程：抑制蛋白質、碳水化合物和脂質的生物合成以及細胞的生長和增殖。 AMPK的作用是通過代謝酶的直接磷酸化，以及通過轉錄調節因子的磷酸化而產生的長期效應。通過重塑肌動蛋白細胞骨架，也起到調節細胞極性的作用；可能是通過間接激活肌球蛋白。伽馬非催化亞基介導與AMP、ADP和ATP的結合，從而激活或抑制AMPK：AMP結合通過誘導磷酸化和防止催化亞基的去磷酸化而導致α催化亞基(PRKAA1或PRKAA2)的變構激活。 ADP還能刺激磷酸化，而不刺激已經磷酸化的催化亞基。 ATP促進催化亞基去磷酸化，使AMPK酶不活躍。

生物過程：參與脂肪酸生物合成，脂肪酸代謝，脂類生物合成，脂類代謝。

動物簡介

蛋白激酶AMP激活的非催化亞基γ1是一種能量傳感器蛋白激酶，在調節系報能量代謝中起著關鍵作用。

營養成分

飼料營養成分：水分≤10%；粗蛋白≥20%；粗脂肪≥4%；粗纖維≤5%；粗灰分≤8%；鈣1.0-1.8%；磷0.6-1.2%。

生物學特性

生長曲線：無壽命：1-2年解剖學：無繁殖學：近交繁殖自發異常：無生理生化指標：無

遺傳信息

根據目標基因Prkag1的基因組結構，參考文獻中的敲除方案，選擇exon3和exon5上各設計兩對gRNA，刪除中間約450bp DNA片段，Prkag1的轉錄產物都發生移碼突變，達到蛋白功能失活的目的。同時，刪除小片段DNA利于小鼠擴繁生產中通過PCR反應鑒定后代基因型。因此，CRISPR設計靶點將設計在轉錄產物Prkag1的exon3和exon5上（下圖中的紅色箭頭所指位置）；

有報道指出PRKAG1、PRKAG2和PRKAG3編碼AMP激活蛋白激酶γ鏈的三種亞型。對肉品質的一個主要影響和對PRKAG3基因RN−突變的背部脂肪厚度的中等影響已經被報道。我們現在已經通過分析輻射雜種(IMpRH)將PRKAG1和PRKAG2映射到SSC5和SSC18的預期位置)。 PRKAG2已經被定位在一個沒有數量性狀位點(QTL)的區域。 PRKAG1已被映射到一個包含影響脂肪性狀QTL的區域附近(但可能在外部)。我們確定了PRKAG1的完整編碼序列。在比較一只梅山大白公豬編碼序列時，未發現錯義突變。然而，還需要進一步的工作來確定PRKAG1中的多態性是否可能對脂肪性狀上觀察到的部分變異性負責【2】哺乳動物5’-AMP激活蛋白激酶(AMP K)是一種由α、β和γ亞基組成的異三聚體蛋白。 α亞基是催化亞基。非催化亞單位AMPK-β和AMPK-γ形式，連同催化AMPK-α，哺乳動物中的活性激酶復合物及其在酵母中的同系物。 AMPK-γ-1的基因最近被指定為PRKAG1。我們從睪丸(1623nt)中分離出小鼠Prkag1cDNA，編碼330AA，并顯示其普遍表達為1.8kb的轉錄本。通過對小鼠、大鼠和人PRKAG1cDNA和蛋白質序列的比較，發現該基因在這些物種中高度保守，在蛋白質水平上同源性為96。 southernblot印跡分析表明，小鼠基因組中存在多個PRKAG基因。 prkag1包含12個帶有短內含子的外顯子。分析50只種間回交小鼠將小鼠基因定位到15號染色體遠端區域【3】。有報道指出編碼AMPKγ亞單位的PRKAG1基因在結直腸癌中的發生移碼突變【4】。